Mic 12a-STAFİLOKOKLARIN İDENTİFİKASYONU:

STAFİLOKOKLARIN İDENTİFİKASYONU:

1. STAF KAT+
2. GRAM + KOK ( eski kültürlerde – boyanabilir),
3. Pigment identifikasyonda önemli değil en iyi 25 C de pigment yapar.
4. Katalaz  + ise aureus   – ise sapr / epid.
5. Glikozu fermentasyon – stafilokoklar fermentatif mikrokoklar oxidatif.
6. Koagülaz: aureus Koag + koagülaz tüpte yada lamda yapılabilir.
   1. Tüp koagülaz: tüpe 1 ml SF + 4 ml sitratlı tavşan plazması eklenir üzerine 1 öze S. Aureus eklenir 1 – 2 – 4 – 8 – 24 .saatlerde pıhtılaşmaya bakılır. Burada sureus ların salgıladıkları bağımsız koagülaz aranır, bu madde plazmadaki Coagulaz Reactingg Factor ( CRF) ile ilişkili kurar ve fibrinojeni fibrine çevirir. Bunun için Ca+ gerekmez. S. Aureus, Pseudomonas aerugenosa, Serratia marcesscens, Streptococcus fecalis te tüp koag + dir. Pseudomonas, cerratia ve strep CRF aktive ettikleri için değil sitratı metabolize ettiklerinden koagülaz + dirler. Citratlı tavşan plazması yerine EDTA lı tavşan plazması kullanılırsa koag negatif olur.
   1. Lam koagülaz: lama 2 bakteri süspansiyonu hazırlanır , birine sf diğerine 1 damla tavşan plazması damlatılır , karıştırılır koagülaza bakılır. Lam koagülaz bağlı koagülaza bakar ( clumping factor) bu salınmaz ve aktive olması için CFR gerekmez. Lam koag – ise tüp te de bakılmalı. Özellikle MRSA lar lam koag – olabilir, tüp bakılırsa + bulunur.
   1. Fibrinojen kaplı lateks parçaları ile de koag bakılabilir, bu yolla clumping faktör bakılır.
7. Termostabil nükleaz:
   1. S. Aureus ısıya dayanıklı nükleaz yapar (DNAz)
   1. S. Epidermidis ısıya dayanıksız nükleaz yapar.
      1. Bu ayrım için termonükleaz agar kullanılır buna DNAz agar denir ortamda termostabil nükleaz varsa (yani s. Aureus varsa ) oluşan oligonükleotidler tolidin mavisi ile pembeye döner + .
8. Lizostafin: stafilokoklar ve mikrokoklar lisozstafin ve furazolidon direncine göre ayrılırlar.
9. Stafilokokların peptidoglikan tabakasındaki glisin bağları lizostafin ( lizozim) ile çözünür. Mikrokoklarda bu bağ yoktur. Lizostafin BY  ortasına damlatılır hassas ise zon oluşur.
10. Slime test: patojen S. Epidermisler epitele yapışmak için glikokalix oluşturur, slime patojenitede önemlidir. Triptikoz soy buyyona ekim yapılıp 1 gece bekletilir sonra BY dökülür tüp yüzeyinde tabaka oluşup oluşmadığına bakılır. İç yüzeyde yapışma varsa slime + denir.
11. Endotoksin: stafilokokal gıda zehirlenmelerinden sorumludur. Elisa ve ifa ile bakılabilir.
12. Stafilokokların antibiyotik duyarlılıkları ile ayrımı:
    1. POLİMİKSİN DUYARLILIĞI >>>DİRENÇLİ İSE S. AUREUS
    1. POLİMİKSİNE HASSAS İSE S. EPİDERMİDİS YADA SAPROFİTİKUS TUR DENİR.
       1. NOVOBİOCİN HASSAS İSE>>>> S. EPİDERMİDİS
       1. NOVOBİOCİN DİRENÇLİ İSE >>>S. SAPROFİTİCUS TUR.
13. Fibrinojen:
    1. Plazma kaplı latex >>clumping faktör bakar >> + ise aureus
    1. IgGkaplı latex >>prot A bakar>>+ ise aureus

		POLİMİKSİN	KAT	KOAG	NOVOBİOCİN	NEOMİSİN	BACİTRACİN
STAFİLOKOK						HASSAS	DİRENÇLİ
	S. AUREUS	DİRENÇLİ	+	+
	S. EPİDERMİDİS	HASSAS	+	–	HASSAS
	S. SAPROFİTİCUS	HASSAS	+	–	DİRENÇLİ
STREPTOKOK			–			DİRENÇLİ
MİKROKOK			+				HASSAS

1. Stafilokokların faj tiplendirmesi : s. Aureus birgurup bakteriofaja karşı duyarlıdır. Faj tiplendirmesi hastane enfeksiyonlarında epidemiyolojik analizlerde kullanılır.
2. S. Aureus antibiyotik direnci: s. Aureus Beta laktamazlar nedeniyle %80 – 90 penisiline dirençlidir. Penisilin direnci plazmide bağlıdır. Ayrıca penisilinaza diençli penisilinlere ( metisilin ozasilin nafcilin) karşı direnç artmaktadır. Metisilin direnci kromozomaldir (PBP ler değişir).