Laboratvuar Teknisyenleri için Lökosit (WBC) Sayımı Nasıl yapılır? 

Araç ve Gereçler: Thoma Lamı, akyuvar sulandırma pipeti, türk eriyiği, lamel,mikroskop

Thoma lamının hazırlanışı: Thoma lamının iki kenarı ıslatılır. Lamel yavaşça bastırılarak bölgeye fixe edilir. Newtonun renk halkalarının oluşmasıyla thoma lamının hazır olduğu anlaşılır.

Deneyin Yapılışı: Akyuvar sulandırma pipetinin 1 çizgisine kadar kan çekilir. Pipetin 11 çizgisine çizgisine kadarda türk eriyiği çekilir. (kan 10 kat sulandırılmış olur). Pipet 3-5 dk. Baş parmağı ve işaret parmağı arasında tutularak, bilek hareketleriyle karıştırılır. Süre sonunda ilk 1-2 damla kan türk eriyiğiyle karışmamış olduğundan pamukla alınır. Karışım thoma lamına 45 derecelik bir açıyla damlatılır. Hücrelerin çökmesi için 3-5 dk beklenir. Sayım 40 lık objektifte yapılır. Bütün orta kareler (400 küçük kare) sayılır. Elde edilen sayı ister aşağıdaki formülde yerine konarak isterse 100 rakamıyla çarpılarak 1 mm 3 deki lökosit sayısı bulunur.

1 mm3 deki lökosit sayısının hesaplanmasında kullanılan formül: bulunan hücre adedi X sulandırma oranı X 4000 / sayılan küçük kare adedi

Laboratuvar teknisyenleri için manual eritrosit ( RBC) sayımı nasıl yapılır?

Araç ve Gereçler: Thoma Lamı, alyuvar sulandırma pipeti, hayem eriyiği, lamel,mikroskop

Thoma lamının hazırlanışı: Thoma lamının iki kenarı ıslatılır. Lamel yavaşça bastırılarak bölgeye fixe edilir. Newtonun renk halkalarının oluşmasıyla thoma lamının hazır olduğu anlaşılır.

Deneyin Yapılışı: Alyuvar sulandırma pipetinin 0.5 çizgisine kadar kan çekilir. Pipetin 101 çizgisine çizgisine kadarda hayem eriyiği çekilir. (kan 200 kat sulandırılmış olur). Pipet 3-5 dk. Baş parmağı ve işaret parmağı arasında tutularak, bilek hareketleriyle karıştırılır. Süre sonunda ilk 1-2 damla kan hayemle karışmamış olduğundan pamukla alınır. Karışım thoma lamına 45 derecelik bir açıyla damlatılır. Hücrelerin çökmesi için 3-5 dk beklenir. Sayım 40 lık objektifte yapılır. Toplam 5 orta kare (80 küçük kare) sayılır. Elde edilen sayı ister aşağıdaki formülde yerine konarak isterse 10000 rakamıyla çarpılarak 1 mm 3 deki eritrosit sayısı bulunur.

1 mm3 deki eritrosit sayısının hesaplanmasında kullanılan formül= bulunan hücre adedi X sulandırma oranı X 4000 /  sayılan küçük kare adedi

GRAM BOYAMA: 

Gram + bakteriler ile Gram – bakteriler arasındaki yapısal fark boyanmalarını etkiler.

Gram pozitif bakterilerde bulunan kalın peptidoglikan tabakası kristal moru boyasını tutar su ile yıkanmada ve de alkolle dekolorizasyonda boyayı bırakmaz. Gram negatif bakterilerde peptidoglikan tabaka incedir ayrıca lipopolisakkarit katmanı vardır bu kristal moru ile boyanmaz. dekolorizasyonda boya tutmaz, zıt boya olan sulu fuksin ile boyanıp kırmızı görülür.

• Örnekten ince bir yayma hazırlanarak lam havada kurutulur.
• Kuruyan lam alevden geçirilerek tespit edilir.
• Kristal viyole dökülerek iki dakika bekletilir.
• Kristal viyole boyası dökülür kalan boya üzerine Lugol solüsyonu dökülür.
• Lugol solüsyonunda iki dakika bekletilir.
• Alkol ve su ile renk giderilinceye dek yıkanır.
• Sulu fuksin dökülerek bir dakika bekletilir.
• Çeşme suyu ile yavaşca yıkanır ve kurutulur.
• İmmersiyon objektifi ile incelenir (100x objektif)
• Mor renkli bakteriler Gram +, Kırmızı renkli bakteriler Gram – olarak adlandırılır.

Alkol ile yapılan renksizleştirme işleminde gram pozitif bakteriler boyayı bırakmazlar, gram negatif bakteriler boyayı bırakırlar ve reksizleşirler, bunlar sulu fuksin ile zıt boyanırlar ve kırmızı görülürler. Eski kültürlerde gram pozitif bakteriler boyayı bırakabilirler yada bazı bakteriler gram boyayı iyi tutamazlar bunlara gram labil bakteriler denir, bazen mor bazen kırmızı boyanırlar  (ör: Laktobasiller ).

Kristal Viyole boyası nasıl hazırlanır? 

Kristal Violet …………………………1gr

Fenol kristali ( Asit Fenik)……….2gr

Etanol (%96) etil alkol…………….10ml.

Distile su………………………………..100ml.

Kristal viyole ve fenol kristalini havanda ez, toz haline gelince yavaşça etanol ekle, etanol bitince distile su ile yavaşça karıştır, filtre kağıdından süz, oda ısısında sakla.

Lugol (Mordan) solüsyonu nasıl hazırlanır?

İyot kristal ………………………………1gr

Potasyum İodür (KI) kristal ……..2 gr

distile su …………………………………300 ml

Potasyum iodür ile iyot kristali havanda iyice ezilip toz haline getirilir, yavaşca distile su ilave edilir, filtre kağıdından süzülerek kahverengi şişeye konur, oda ısıında saklanır.

Bazik Fuksin ( stok solüsyon ) nasıl hazırlanır ? 

Bazik fuksin ……………………………10 fr

Etanol %96 (etil alkol)……………..100 ml

bazik fuksin havanda ezilir, toz haline gelince yavaşca alkol ile karıştırılır.37 C de bir gece etüvde bekletilir, filtre kağıdından süzülerek cam kapaklı şişede oda ısısında saklanır.

Sulu Fuksin solüsyonu nasıl hazırlanır?

Bazik Fuksin stok solüsyonu ……..10 ml

Distile su…………………………………..100 ml

Bazik Fuksin distile suyla iyice karıştırılarak filte kağıdından süzülür, cam kapaklı şişede oda ısısında saklanır.