BRUCELLA AGLÜTİNASYON TESTLERİ

BRUCELLA LAM AGLUTİNASYON TESTİ (ROSE-BENGAL):

Kullanım amacı:

Brucella için spesifik olan İmmunoglobulin G’leri saptamak amacıyla kullanılır.

Testin yapılışı:

• Serum ve antijen oda sıcaklığında 10-15 dakika bekletilir.
• Porselen veya cam lam üzerine 1 damla antijen (0,03 ml) damlatılır.
• Yanına bir damla serum (0,03 ml) damlatılır.
• Antijen ve serum bir çubuk ile karıştırılır.
• Lam rotasyon hareketi ile ileri geri hareket ettirilir.
• Agglütinasyon dört dakika içinde değerlendirilir.
• Herhangi bir agglütinasyon görülmesi pozitif olarak değerlendirilir.
• Pozitif serumlara tüp agglütinasyon testi ile kontrol edilmelidir.

 

BRUCELLA TÜP AGLÜTİNASYON TESTİ (WRİGHT):

• %0.5 fenollu fizyolojik tuzlu su hazırlanır (FFTS).
• 5 adet temiz seroloji tüpü (13×100 mm) alınarak bir spora dizilir.
• Birinci tüpe 0,9 ml FFTS, diğer tüplere 0,5 ml FFTS sırayla pipetlenir.
• Birinci tüpe 0,1 ml hasta serumu ilave edilir. Karıştırıldıktan sonra 0,5 ml alınarak ikinci tüpe konur. İkinci tüpte de karıştırdıktan sonra 0,5 ml alınıp bir sonraki tüpe aktarılır, böylece devam edilir.
• Son tüpten alınan 0,5 ml atılır.
• Her tüpe sişedeki Brucella antijeninden 0,5 ml eklenir. Böylece birinci tüpten itibaren 1/20, 1/40, 1/80, 18/160, 1/320 sulandırımları elde edilir.
• Tüpler 37 ^oC’de bir gece (17-24 saat) inkübe edildikten sonra okunur.

 

Merkaptoetanollü Wright:

IgM antikorları tahrip edilerek sadece IgG’lerin saptanması amacıyla yapılır. Merkaptoetanol veya Rivanol,  IgM’deki bisülfit köprülerini yıkarak agglütinasyon etkinliğini yok eder.

FTS yerine 0,05 M 2 Merkaptoetanollu tuzlu su kullanılır. Sonuç aynı şekilde değerlendirilir.

Aynı amaçla Rivanol de kullanılabilir.

 

Coombs’lu Wright:

Wright testinin negatif bulunduğu hastalarda blokan antikorları ortaya koymak için yapılır.

• Önce normal tüp agglütinasyon deneyi yapılır.
• Aglütinasyon vermeyen tüpler  2000 rpm’de 20 dakika çevrilir, üstteki sıvı atılarak yine bir miktar tuzlu su konur, karıştırılır ve santrifüjlenir. Bu işlem 3 kere yapılır.
• Her tüpe 0,45 ml tuzlu su eklenerek süspanse edilir.
• Her tüpe bir damla Coombs serumu damlatılır.
• 37 ^oC’de 24 saat bekletildikten sonra agglütinasyon okunur.